摘要：本课题前期基于结合型寡聚核苷酸，利用一步共装载技术构建了药物与基因共载纳米系统（CPN-PDR），可有效共装载药物与基因，并成功递送至细胞内。本次研究主要对该共载纳米系统在体外细胞毒性、基因转染、体内安全性等方面做进一步的评价和讨论。本研究选取多柔比星（Dox）敏感的 MCF-7 细胞作为模型细胞。首先对纳米粒材料和空白纳米粒的细胞毒性进行考察；其次采用荧光实时定量 PCR（Real Time-PCR）和  Western Blot  实验考察基因转染效率，采用  MTT  法对纳米粒抗肿瘤细胞增殖能力进行评价；最后对纳米粒的体外溶血情况和体内安全性进行初步评估。MTT  实验结果显示，与 PEI 相比，富含 CGA 重复序列的寡聚核苷酸（CGA-ODNs）和 pH 敏感靶向材料 CMCS-PEG-NGR（CPN）在 72h 内无明显细胞毒性；空白非靶向纳米粒（bPDR）的细胞毒性在 24h 与空白靶向纳米粒（bCPN-PDR）无显著性差异，而在 48h 和 72h，bPDR 的细胞存活率显著低于  bCPN-PDR（P <0.05）；mRNA 水平检测结果显示递送抗 VEGF siRNA 能显著降低细胞内  VEGF mRNA  水平，CPN 修饰的单载  siRNA  纳米粒（CPN-PR）、CPN-PDR 与 Lipo/siRNA  均无显著性差异；Western Blot  结果表明转染 48h，CPN-PDR 组能明显降低 VEGF 蛋白的表达量，与 mRNA 水平检测结果一致；抗肿瘤细胞增殖实验结果显示 CPN-PDR 的 IC50 值显著低于游离药物 Dox 和 CPN 修饰的单载 Dox 纳米粒（CPN-PD），CPN-PDR 的抗肿瘤细胞增殖能力显著增强（P <0.05）；溶血实验结果显示 CPN-PDR 不会引起红细胞溶血；组织切片结果显示，小鼠给予 CPN-PDR 后各器官组织特征与生理盐水组无显著差异，溶血试验和免疫组化试验结果表明 CPN-PDR 具有良好的体内外生物相容性。CPN-PDR 可被开发成一种非常有潜力的用于抗肿瘤治疗的共递送纳米载体。
关键词：共递送；多柔比星；VEGF；细胞毒性；基因转染