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Authors Yu F, Xiong YM, Yu SC, He LL, Niu SS, Wu YM, Liu J, Qu LB, Liu LE, Wu YJ
Received 27 September 2017
Accepted for publication 7 December 2017
Published 17 January 2018 Volume 2018:13 Pages 429—437
DOI https://doi.org/10.2147/IJN.S152618
Checked for plagiarism Yes
Review by Single-blind
Peer reviewers approved by Dr Alexander Kharlamov
Peer reviewer comments 4
Editor who approved publication: Dr Linlin Sun
背景:DNA 甲基化转移酶1(DNA methyltransferase1,DNMT1)是催化 DNA 甲基化过程中最重要的酶,与多种肿瘤以及年龄相关慢性病的发生发展有密切关系。DNMT1 已经成为疾病早期诊断重要的生物标志物,也是肿瘤药物作用的重要靶点。然而,目前针对 DNA 甲基化转移酶(MTase)的检测主要集中于原核生物的甲基化转移酶,且主要关注 MTase 活性检测,而对人体血清中 DNMT1 水平检测的方法研究不多。因此建立一种高效、简便、快速检测血清中 DNMT1 水平的方法具有重要意义
方法:本研究利用 CdSe/ZnS 量子点高量子产率、一元激发、多元发射等光学特性,结合 Fe3O4 磁性纳米颗粒的快速分离性能以及免疫反应的特异性,优化反应条件,建立了基于量子点的荧光免疫分析(FLISA)方法,实现对血清样品中 DNMT1 水平的定量分析。
结果:在最佳的反应条件下,本研究建立的 FLISA 法的最低检出限为 0.1ng/mL,线性范围 0.1~1500ng/mL,回收率为 91.67%~106.50%,板内和板间的相对标准偏差(RSD)分别为 5.45%~11.29%(n=3)和 7.03%~11.25%(n=3);与 DNA 甲基化转移酶 3a 和 DNA 甲基化转移酶 3b 交叉反应率分别为 4.0% 和 9.4%,方法特异性好。将建立的 FLISA 成功用于实际血清样品的检测,并与市售的 ELISA 试剂盒进行比较,结果显示两种方法具有良好的相关性(r =0.866,p =0.001),且 FLISA 法线性范围更宽,检测时间更短。
结论:本研究建立的 FLISA 法,灵敏度、精密度和准确度均较好,检测时间较短,可使用于大量血清样本中 DNMT1 水平的快速检测。
关键词:DNA 甲基化转移酶 1,量子点,荧光免疫分析,羧基磁珠,高通量检测,血清样品