Guobing Zheng,1,* Chenxia Xu,1,* Fenghua Xie,1 Qiaoli Li,2 Zhanhui Ou,3 Degang Wang,1 Haijun Li1 

1Prenatal Diagnosis Center, Boai Hospital of Zhongshan, Zhongshan, Guangdong, 528400, People’s Republic of China; 2Department of Ophthalmology, The Sixth Affiliated Hospital of South China University of Technology, Foshan, Guangdong, 528200, People’s Republic of China; 3Reproductive Medicine Center, Boai Hospital of Zhongshan, Zhongshan, Guangdong, 528400, People’s Republic of China

*These authors contributed equally to this work

Correspondence: Haijun Li, Prenatal Diagnosis Center, Boai Hospital of Zhongshan, No. 6 Chenggui Road, Zhongshan, Guangdong, 528400, People’s Republic of China, Tel +86-076088776370, Email navy1003@163.com
摘要

目的：视网膜色素变性（retinitis pigmentosa，RP）是一组高度遗传异质性的遗传性视网膜营养不良，常伴黄斑受累。IMPG2变异可导致RP及相关黄斑疾病，但深部内含子变异的致病机制鲜有功能学证据。本研究旨在鉴定并功能验证一例伴黄斑受累RP患者的IMPG2新型深部内含子变异。

方法：对先证者进行系统眼科检查并评估表型特征；采用全基因组测序（WGS）筛查致病变异，并进行家系共分离分析。使用剪接预测工具（SpliceAI、MaxEntScan、NNSplice）评估变异对剪接的潜在影响。构建携带野生型（WT）或突变型（Mut）序列的双minigene载体（pcMINI与pcMINI-C），分别转染HEK293T与HeLa细胞，进行RT-PCR及Sanger测序分析剪接产物。

结果：在IMPG2中发现一例新的纯合深部内含子变异NM_016247.4:c.909-1659A>G，公共数据库未收录。体外预测提示该变异可激活隐匿剪接供体位点（SpliceAI评分0.55），导致假外显子插入。双minigene剪接实验在两种载体与两种细胞系中均稳定观察到异常剪接：突变构建体出现包含132 bp假外显子的异常转录本，并产生提前终止密码子，提示更可能触发无义介导的mRNA降解（nonsense-mediated decay，NMD），而非形成稳定截短蛋白。家系共分离支持常染色体隐性遗传。先证者表现为自幼夜盲、进行性周边视野缩窄，并伴黄斑结构及功能受损，符合IMPG2相关视网膜病变表型。

结论：本研究提供了深部内含子IMPG2变异可通过假外显子激活引起异常剪接并导致提前终止密码子的功能学证据，扩展了IMPG2的致病变异谱，提示深部内含子变异的致病潜力，并强调功能剪接实验在遗传性视网膜疾病中对不确定意义变异重新分级的重要性。

关键词