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乙肝核心蛋白蛋白颗粒嵌合奈瑟菌表面蛋白 A 免疫保护性研究

 

Authors Hou Y, Yan T, Cao H, Liu P, Zheng K, Li Z, Deng Q, Hu S

Received 21 February 2019

Accepted for publication 1 August 2019

Published 16 August 2019 Volume 2019:14 Pages 6601—6613

DOI https://doi.org/10.2147/IJN.S206210

Checked for plagiarism Yes

Review by Single-blind

Peer reviewers approved by Dr Alexander Kharlamov

Peer reviewer comments 2

Editor who approved publication: Dr Lei Yang

目的初步探究乙肝核心蛋白(HBc-N144)嵌合具有高度保守性奈瑟菌表面蛋白 ANeisseria  surface protein ANspA构成的病毒样颗粒HBc-N144-NspA在小鼠体内诱导的特异性体液免疫和细胞免疫应答水平,特别是黏膜免疫应答水平及其免疫保护效果,为寻找高效黏膜免疫佐剂、研制高效B群流脑疫苗提供实验依据
方法1. 构建 HBc-N144-NspA 病毒样颗粒。通过生物信息学查找及截取乙肝核心蛋白、奈瑟菌表面蛋白 基因序列,在截短的乙肝核心蛋白(HBc-N144)的免疫显性区域(MIR 区)79-80 位氨基酸之间插入 NspA 基因获得测序正确的原核质粒 pET28a-HBc-N144-NspA,再融合质粒表达重组蛋白 HBc-N144-NspA纯化后通过透射电镜观察其所形成的病毒样颗粒。2. 评价 HBc-N144-NspA 重组蛋白疫苗的免疫效果。原核表达的重组蛋白 HBc-N144-NspA,纯化后免疫雌性 BALB/C 小鼠,间接 ELISA 法检测血清中特异性 IgG IgG1 IgG2a 以及生殖道分泌液中 sIgA。分离免疫小鼠脾淋巴细胞,检测培养上清中 IL-4IFN-γ 和 IL-17A 含量;流式细胞术检测脾淋巴细胞 Th1 和 Th2 亚群。血清体外杀菌试验检测免疫血清的体外杀菌活性;末次免疫后 周,致死剂量的脑膜炎奈瑟菌 MC58 攻击,观察疫苗的免疫保护效果。通过采集小鼠免疫接种部位肌肉组织进行病理切片分析炎性浸润情况。
结果1. 成功构建了 HBc-N144-NspA 病毒样颗粒。通过透射电镜观察 HBc-N144HBc-N144-NspA 呈颗粒样结构,它们大小较均,粒径分别为 30nm 及 120nm2. 重组蛋白疫苗组 HBc-N144-NspA+F弗氏佐剂)、HBc-N144-NspA 和 rNspA+分别免疫小鼠所产生的特异性 IgG 和 sIgA 在免疫后 42 达到峰值,其中 HBc-N144-NspA 组明显高于 rNspA/F 组(<0.05HBc-N144-NspA+F 和 HBc-N144-NspA 组之间相比无显著性差异(>0.05)。HBc-N144-NspA+FHBc-N144-NspANspA+F 组特异性 IgG1/IgG2a 比值均大于 1。流式细胞术结果显示,HBc-N144-NspA+FHBc-N144-NspA 和 NspA+F 诱导的免疫应答均倾向于 Th2 型。细胞因子水平的定量检测结果显示,HBc-N144-NspA+F 和 HBc-N144-NspA 组所产生的 IL-4INF-γ 和 IL-17A 水平无明显差异,但均高于 NspA+F 。致死量 MC58 攻击试验小鼠 72h HBc-N144-NspA+FHBc-N144-NspA 均获得了良好的免疫保护效果小鼠存活率均达 90%,明显高于 rNspA+F 组 80% 存活率。免疫后第六周血清体外杀菌抗体滴度HBc-N144-NspA+F 为 1:16HBc-N144-NspA 和 rNspA+F 均为 1:8病理切片结果显示,HBc-N144-NspA+F 组与 NspA+F 组均出现明显的炎性细胞浸润,而 HBc-N144-NspA 组未产生明显的炎性浸润
结论1. 构建的 HBc-N144-Nsp病毒样颗粒具有良好的免疫原性,可以诱导小鼠产生较高水平的特异性体液免疫,尤其是黏膜免疫。2. HBc-N144-Nsp重组蛋白疫苗组血清体外杀菌活性较高,对实验小鼠有较强的保护作用,且免疫保护效果明显高于 NspA+F 
关键词:乙肝核心蛋白;奈瑟菌表面蛋白 A病毒样颗粒;重组蛋白疫苗;群脑膜炎奈瑟菌




Figure 2 Models of the NspA and HBc-N144-NspA proteins predicted using...