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CRISPR/Cas9 基因敲除 CXCR 4 和 CXCR 7 对三阴性乳腺癌细胞功能的影响

 

Authors Yang M, Zeng C, Li P, Qian L, Ding B, Huang L, Li G, Jiang H, Gong N, Wu W

Received 22 November 2018

Accepted for publication 6 February 2019

Published 17 May 2019 Volume 2019:12 Pages 3849—3858

DOI https://doi.org/10.2147/OTT.S195661

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Editor who approved publication: Dr XuYu Yang

背景:乳腺癌是威胁妇女健康的最常见恶性肿瘤之一。三阴性乳腺癌(TNBC)是一种侵袭转移率高的特殊类型乳腺癌 CXCL12 及其受体 CXCR 4 和 CXCR 7 在乳腺癌的发生发展中起着至关重要的作用。本研究旨在探讨 CXCR 4 和 CXCR 7 对 TNBC 功能的影响。
材料与方法:采用 CRISPR/Cas9 技术,在 TNBC 细胞系(MDA-MB-231)中对 CXCR 4 或 CXCR 7 基因进行单基因敲除和共基因敲除。单基因敲除和共基因敲除细胞的筛选和验证采用 PCR 产物测序和 Western blot 方法进行;采用细胞 CCK-8 试验和平板克隆实验观察单基因敲除和共基因敲除对 TNBC 细胞增殖的影响;用 Transwell 实验和划痕实验检测 TNBC 细胞的迁移和侵袭,用流式细胞仪检测基因敲除后细胞周期分布的变化。实验组加入 CXCL 12,观察 CXCL 12 对单基因敲除和共敲除后对细胞迁移和侵袭影响的差异。
结果:CXCR 4 或 CXCR 7 基因单敲除可降低细胞增殖、生长、迁移和侵袭,延缓 G1/S 周期的转化。而共基因敲除后则对于这些生物学能力的抑制作用更为显著。在基因敲除组和对照组中,加入 CXCL 12 的细胞的迁移和侵袭能力明显强于未加入 CXCL 12 的细胞。在 CXCR 4 和 CXCR 7 共基因敲除组中,CXCL 12 诱导的迁移和侵袭比单基因敲除组小。
结论:CXCR 4 和 CXCR 7 基因的敲除影响 CXCL 12 的结合能力和功能,显著抑制 TNBC 细胞的恶性进程,有可能成为治疗 TNBC 的潜在靶点。
Keywords: triple-negative breast cancer cells, TNBC, CXCR4, CXCR7, CXCL12, CRISPR/Cas9




Figure 4 Knockout of the target genes CXCR4 and CXCR7 can significantly inhibit...