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银杏酮酯联合阿司匹林协同抗血小板作用研究

 

Authors Ke J, Li MT, Huo YJ, Cheng YQ, Guo SF, Wu Y, Zhang L, Ma J, Liu AJ, Han Y

Received 6 May 2021

Accepted for publication 12 July 2021

Published 14 August 2021 Volume 2021:15 Pages 3543—3560

DOI https://doi.org/10.2147/DDDT.S318515

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Editor who approved publication: Dr Tuo Deng

目的:在体外模型中探究银杏酮酯与阿司匹林联合应用的抗血小板效应,分析其联合应用的协同作用及其可能的作用机制。
材料与方法:利用兔血制备贫血小板血浆和富血小板血浆,分别以花生四烯酸(AA)、二磷酸腺苷(ADP)、血小板活化因子(PAF)和胶原为诱导剂,检测银杏酮酯(0.01 mg/ml-3 mg/ml)、阿司匹林(0.01 mg/ml-3 mg/ml)单独应用及二者 110.01 mg/ml-3 mg/ml)联合应用时对血小板聚集的抑制作用。使用 Synergy finder2.0 软件分析银杏酮酯与阿司匹林联合抗血小板是否有协同作用。使用 UPLC-Q/TOF-MS 分析鉴定银杏酮酯的化学成分,通过 TMCSP 数据库筛选出其中的候选活性成分。在 TCMSPCCGSSwiss target prediction 及 DrugBank 等数据库中收集银杏酮酯活性成分及阿司匹林的作用靶点。在 GenCLiP 数据库中收集血小板聚集相关靶点。构建化合物-血小板聚集靶点网络,并进行 KEGG 和 GO 富集分析,明确银杏酮酯和阿司匹林联合抗血小板作用可能的关键信号通路和生物过程。使用 ELISA 方法,在体外模型中检测银杏酮酯和阿司匹林单独应用及二者 1联合给药后血栓素 B2TXB2)、环磷酸腺苷(cAMP)及血小板活化因子受体(PAFR)的水平。
结果:与银杏酮酯或阿司匹林单独应用相比,二者 1联合应用对 AAADPPAF 和胶原诱导的血小板聚集都有很强的抑制作用,联合应用半抑制浓度(IC50)分别为:0.067 mg/ml1.474 mg/ml0.2886 mg/ml 0.149 mg/ml。协同分析显示,在 AA 诱导的血小板聚集中,银杏酮酯联合阿司匹林可发挥协同抗血小板作用,而在 ADPPAF 和胶原诱导的血小板聚集中发挥相加抗血小板作用。经成分鉴定及活性筛选后,银杏酮酯中有7个成分被认定为潜在的抗血小板活性成分。成分-靶点网络图及富集分析表明,银杏酮酯主要通过 cAMP 通路、AA 代谢及钙离子信号调节血小板聚集。阿司匹林主要通过 AA 代谢及血小板活化通路调节血小板聚集。ELISA 实验表明银杏酮酯联合阿司匹林可以显著增加血小板内 cAMP 水平,降低 TXB2 和 PAFR 的水平。
结论:银杏酮酯联合阿司匹林有更强的抗血小板效应,二者联合应用可以发挥协同或相加抗血小板作用。其机制可能与增加血小板 cAMP 水平,降低 TXB2 和 PAFR 水平有关。
关键字:抗血小板;银杏酮酯;阿司匹林;协同作用