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胆绿素还原酶 A(BLVRA)通过激活 Wnt/β-catenin 信号通路来促进结直肠癌细胞进展

 

Authors Mao H, Xu Y, Zhang Z, Sun G, Wang Z, Qiao D, Yin X, Liu S, Bo P

Received 16 December 2019

Accepted for publication 6 March 2020

Published 23 April 2020 Volume 2020:12 Pages 2697—2709

DOI https://doi.org/10.2147/CMAR.S242531

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Editor who approved publication: Dr Chien-Feng Li


目的:胆绿素还原酶 ABLVRA)是一种能够将胆绿素 IXα 转化为胆红素 IXα 的多效性酶,与多种疾病有关,包括肿瘤。它在多种肿瘤中呈过表达,能够促进肿瘤的进展和转移,但其在大肠癌中的作用目前尚无相关报道。本研究旨在通过体内外实验探讨胆绿素还原酶 ABLVRA)在结直肠癌中的作用及可能机制。
方法:本研究选取结直肠癌患者和结肠癌细胞株 HT-29 和 SW620 进行体内外实验。采用 ELISA 和免疫组化(IHC)方法检测患者外周血及肿瘤组织中的 BLVRA 的水平;用慢病毒载体转染建立 BLVRA 敲除和过表达的细胞株,采用 qRT-PCR 和 Western blotting 检测 BLVRA mRNA 和蛋白的表达,MTT 法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Transwell 法检测细胞迁移和侵袭能力,免疫荧光检测 E-Cadherin 和 Vimentin 的表达,Western blotting 检测细胞凋亡相关蛋白、EMT 相关蛋白和 Wnt/β-catenin 信号通路及其靶蛋白的表达。
结果:体内研究结果显示 BLVRA 在结直肠癌患者中呈高表达,且 III/IV 期的患者其表达水平明显高于 I/II 期的患者,与肿瘤发病部位无关,提示 BLVRA 高表达的患者预后不良。体外研究显示 BLVRA 过表达能够增加结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭的能力,抑制 E-cadherin 的表达,促进 Vimentin 及 snail 的表达,从而促进 EMT 进程,同时能够降低细胞凋亡率,减少促凋亡因子 BAX 及 Caspase-7 的表达,增加抗凋亡因子 Bcl-2 及 Survivin 的表达。同时,BLVRA 过表达能上调 Wnt/β-catenin 信号通路 Wnt5a 及 β-catenin 蛋白及其阳性靶蛋白 C-mycCOX-2cyclin D1 及 p-GSK-3β 的表达,下调 p-β-catenin 及阴性靶蛋白 p-PTEN 的表达,提示 BLVRA 在结肠癌中的生物学效应可能是通过 Wnt/β-catenin 信号通路介导的。而对 BLVRA 的敲低则表现出相反的生物学作用。
结论:BLVRA 可能是结直肠癌一个潜在的预后标志物和治疗靶点。
关键词:胆绿素还原酶 A,结直肠癌,肿瘤进展,Wnt/β-catenin 信号通路




Figure 2 (A, B) Western blot analysis of BLVRA expression in five CRC cell lines and...